液相色谱仪原理 HPLC分析的基本原理

高效液相色谱法（HPLC），亦称高压液相色谱、高速液相色谱等，是色谱法领域内的一个重要分支。此方法以液体为流动相，采用高压输液系统，将单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱。在柱内，各成分通过与固定相和流动相之间的相互作用得以分离，随后进入检测器进行检测，从而实现对试样的高效分析。该方法在化学、医学、工业、农学、商检以及法检等多个学科领域中，均是重要的分离分析技术【1】。

HPLC工作原理简述：

混合物中的各组分在固定相与流动相的相互作用下，于色谱柱内实现分离纯化。固定相为色谱柱中的微小多孔颗粒材料，而流动相则是在高压作用下通过色谱柱的溶剂或混合溶剂。样品通过注射器注入，与流动相混合后，各组分以不同速率通过色谱柱。因各组分与固定相的吸附能力不同，它们会依次流出色谱柱，并经合适的检测器将组分浓度转换为电信号，最终在HPLC软件上呈现色谱图。

HPLC技术优势概览：

HPLC以其高压、高效、高速、高灵敏度及高选择性的特点，在分析领域中独树一帜。

关于HPLC实验用水的建议：

高效液相色谱HPLC的流动相应使用电导率为18.2 M/cm（25℃）的超纯水。此水需通过0.22um终端过滤器，以去除颗粒物、有机物、无机离子及CO2等气体，确保其达到实验所需的高纯度。实验中推荐使用低TOC含量的一级水。

水中的杂质可能对实验造成以下影响：

1. 在梯度运行中产生污染物峰，增加峰的鉴定和量化的难度。

2. 当使用含有杂质的超纯水配置标准液时，样品的鉴定和量化精确度会受影响。

3. 可能会对高效液相色谱HPLC的柱子造成损害。

超纯水机推荐用于液相色谱实验：

为保证实验的顺利进行，选择一台性能优良的超纯水机至关重要。

HPLC日常操作及维护注意事项【3】【4】：

流动相的选择：应使用高纯度试剂，避免微量杂质长期累积对色谱柱和检测器造成损害。

防止流动相与固定相发生不利反应，以免降低柱效或损坏柱子。

确保试样在流动相中有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。

流动相需满足检测器的要求，如使用紫外检测器时，流动相不应有较强的紫外吸收。

泵的维护保养要点：

1. 预防固体微粒进入泵体，以免磨损柱塞、密封环缸体和单向阀。应对流动相进行预过滤。

2. 流动相不应含有任何腐蚀性物质。含缓冲液的流动相不宜在泵内长时间保留。分析工作结束后，应充分清洗泵，再换成适当的保存溶剂。

3. 注意溶剂瓶内的流动相使用情况，避免空泵运转造成的磨损。

4. 保持工作压力在规定范围内，避免高压密封环变形和漏液。

紫外检测器的维护保养要点：

1. 减少气泡产生，以保持基线稳定并避免干扰。

2. 定期冲洗系统，防止流通池干涸。

3. 注意氘灯（光源）的使用时间及噪音变化，及时进行调整或更换。

4. 保持检测器周围环境清洁，防止尘埃覆盖光学元件。

内容引用：

【1】高效液相色谱法在中草质量控制中的应用相关研究资料。