琼脂糖凝胶电泳的原理_电泳原理及过程


免疫固定电泳,实则一种综合了区带电泳与自由免疫扩散的免疫化学分析技术。这一技术主要涵盖免疫电泳与免疫固定电泳两个层面。

对于免疫电泳,它能够通过分析沉淀线的数量、形状及位置,精确地鉴定和解读样品中抗原的成分及其特性。

关于琼脂凝胶板的制作,经过凝固打孔后,将待检的抗原标本与正常血清对照加入其中,再通过区带电泳使其根据所携带的电荷、分子量及构型差异,形成不可见的多个区带。

在电泳过程结束后,会沿特定方向挖出一条与电泳方向平行的槽,接着加入相应的抗血清。室温或37℃的条件下,进行双向免疫扩散,24小时后观察结果。抗原与抗体在琼脂中双向自由扩散,当它们在比例适宜的位置相遇时,会形成明显的弧形沉淀线。

此技术的原理与免疫电泳有所相似,但也有所区别。在区带电泳完成后,不是将抗血清放在旁侧槽中,而是将其置于区带的表面,如乙酸纤维素或滤纸条已浸透抗血清。这样使得抗体与对应的抗原直接发生沉淀反应,抗原因此被固定在电泳的位置上,从而可以对样本中的成分及其性质进行深入的分析和鉴定。

在琼脂糖凝胶或乙酸纤维素膜上对患者的血清或血浆进行区带电泳,使蛋白质分离成不同的区域。电泳后,将抗血清加到这些蛋白质区带的表面,或者将浸泡过相应抗体的乙酸纤维素薄膜或滤纸条贴在区带上。这样,抗原与相应的抗体发生沉淀反应,形成的免疫复合物会嵌入固定的支持物中。随后洗去未结合的抗原和抗体,并通过染色观察结果。经过免疫固定的区带会呈现出单一的免疫复合物沉淀带,与同时电泳但未经免疫固定的标本相比较,可以明确该蛋白的成分,进而对样品中的成分及其性质进行详细的分析和鉴定。

无论是区带、电泳还是免疫固定,都是为了更精确地解析和鉴定样本中的成分及其特性。