酶标仪检测细胞凋亡率的原理

实验方法原理：

体外培养细胞的生长和能力可以通过指数来表示。随着指数的提高，细胞进入指数生长期。指数是测定细胞周期的重要指标，也是选择实验细胞的重要依据。

实验步骤：

一、对细胞进行消化，将细胞悬液接种在含盖玻片的培养皿中。

二、在CO2培养箱中培养48小时，使细胞生长在盖片上。

三、取出盖片，按照以下顺序操作：

1. PBS漂洗3分钟。

2. 置于甲醇：冰醋酸=3：1的固定液中固定30分钟。

3. Giemsa液染色10分钟。

4. 自来水冲洗。

四、将晾干后的盖片反扣在载玻片上，进行镜检。

五、计算指数，即细胞数除以总细胞数，再乘以100%。

细胞周期是指细胞从一次结束到下一次结束所经历的时间，它反映了细胞的增殖速度。为了测定细胞周期，现在多采用其他方法，如BrdU的利用。当BrdU加入培养基后，可作为细胞DNA复制的原料。经过特定的细胞周期后，反映在染色体上会有明显的表现。通过染色片、紫外照射、Giemsa液染色等步骤，可以观察到不同细胞期的指数，进而计算出细胞周期的值。

关于流式细胞仪的工作原理，待测细胞在气体的压力下进入流动室，在鞘液的约束下排成单列并由流动室的喷嘴形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，进一步分析其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。

关于实验步骤和注意事项：

一、取对数生长期的细胞进行消化，并用培养液吹打后离心去上清。

二、用PBS清洗细胞两次，并加入PI等染料进行染色。

三、对样品进行分析测定和打印。

至于您提到的关于胃粘膜DNA含量及倍体检查、PI分析细胞周期及凋亡率等相关问题，样本可以用低温或乙醇固定的方式保存，但要确保固定效果和保存时间的平衡。关于RNA酶的配制和使用、流式检测细胞周期的温度控制等问题，建议在具体实验操作中参考相关文献或实验指南，以确保实验的准确性和可靠性。