沉淀DNA时为什么要用无水乙醇

【实验目的】

（1）掌握溶菌酶—CTAB—蛋白K—冻融法提取土壤微生物基因组DNA的原理及操作过程。

（2）熟练掌握琼脂糖凝胶电泳的操作过程，以便对提取的DNA进行质量评估。

【实验原理】

本实验旨在通过溶菌酶—CTAB—蛋白K—冻融法提取土壤微生物基因组DNA。具体原理如下：

（1）通过2％偏磷酸钠分散土壤微生物，配合磁力搅拌器，使微生物从土壤颗粒中释放。

（2）采用可溶性PVP去除土壤中的杂质，以减少对后续DNA提取的影响。

（3）通过化学裂解法（溶菌酶细菌细胞壁，CTAB细胞膜等）和物理方法（超声波破碎、冻融法等）联合破壁和破膜，使DNA得以游离出来。

（4）利用CTAB与多糖、变性蛋白细胞碎片结合形成不溶物的特性，以及CaCl2和BSA的特定作用，进一步去除腐殖酸。

（5）通过氯仿/异戊醇抽提去除蛋白质，再用PEG8000沉淀基因组DNA，70％乙醇去除溶于水的盐及杂质。

（6）最后通过RNA酶的加入去除RNA，得到高质量的DNA。

【实验材料、试剂及仪器】

详细列举了实验所需的各类土壤、实验试剂以及实验仪器。

【实验步骤】

（1）土壤样品的预处理。

（2）DNA提取缓冲液的处理及土壤沉淀的获取。

（3）土壤沉淀的重悬及溶菌酶、蛋白K等处理。

（4）DNA的提取及纯化。

（5）RNA的去除及DNA的溶解。

（6）DNA质量的检测——琼脂糖凝胶电泳。

【实验注意事项】

强调了实验过程中的关键注意事项，如充分的搅拌、土壤洗涤的重要性、土壤量的控制、细胞裂解的均匀性等。

【典型实验结果分析】

对常见的实验结果进行了分析，并给出了相应的解决办法。

【实验讨论】

对于PEG8000沉淀法的适用对象及优点进行了讨论，指出该方法适用于大片段DNA，尤其是基因组DNA的沉淀，可以有效去除腐殖质和腐殖酸。但在得率方面略低。同时也欢迎同学们提出更多关于实验的疑问和想法，共同讨论和学习。